[実験プロトコル]
CTAB×フェノクロによるDNA抽出
各種サンプル肉片からDNAを抽出する。キットを使う場合はキット添付のプロトコルを参照。
必要なもの
- 1.5mlチューブ 3本 /sample
- 2x CTAB 300ul /sample
- 10mg/ml Proteinase-K 20ul /sample
- クロロホルム 300 + 150ul /sample
- 平衡化フェノール 150ul /sample
- 100%エタノール 150ul /sample
- 70〜80%エタノール 150ul /sample
- ミリQ 50ul /sample
- サンプル肉片 適量
手順
- 1.5mlチューブに2x CTAB 300ulと10mg/ml Proteinase-K 20ulを入れ、サンプル肉片を投入
- 60℃で1時間以上 or 56℃で1日以上 or 38℃で1週間以上インキュベート
- サンプルをスピンダウン
- クロロホルム 300ulを加えてvoltex
- 20,000×gで8分間遠心
- 新しい1.5mlチューブにクロロホルム 150ulと平衡化フェノール 150ulを入れる
- 5の上澄み150ulを6に移してvoltex
- 20,000×gで8分間遠心
- 新しい1.5mlチューブに100%エタノール 150ul入れる
- 8の上澄み150ulを9に移す
- 20,000×gで15分間遠心(できれば低温でブレーキは弱)
- 上澄みを捨てて70〜80%エタノール 500ul以上加えてタッピング
- 20,000×g 常温で5分間遠心(ブレーキ弱)
- 上澄みを捨てて半日〜1日放置して乾燥
- ミリQ 100ulを加えて溶かし、冷蔵庫か冷凍庫へ入れて保管
最後のミリQの量は肉片量、ペレットサイズに応じて適宜調整する。厳密に等濃度にする時は分光光度計を使う。
DNA抽出キットを使うともっと楽に高い収率でクリーンなDNAが得られる。小さなサンプルから核DNAを抽出する場合にはこちらがお薦め。
最終更新時間:2006年12月14日 20時46分55秒