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CTAB×フェノクロによるDNA抽出

[実験プロトコル]

CTAB×フェノクロによるDNA抽出

 各種サンプル肉片からDNAを抽出する。キットを使う場合はキット添付のプロトコルを参照。

必要なもの

  • 1.5mlチューブ 3本 /sample
  • 2x CTAB 300ul /sample
  • 10mg/ml Proteinase-K 20ul /sample
  • クロロホルム 300 + 150ul /sample
  • 平衡化フェノール 150ul /sample
  • 100%エタノール 150ul /sample
  • 70〜80%エタノール 150ul /sample
  • ミリQ 50ul /sample
  • サンプル肉片 適量

手順

  1. 1.5mlチューブに2x CTAB 300ulと10mg/ml Proteinase-K 20ulを入れ、サンプル肉片を投入
  2. 60℃で1時間以上 or 56℃で1日以上 or 38℃で1週間以上インキュベート
  3. サンプルをスピンダウン
  4. クロロホルム 300ulを加えてvoltex
  5. 20,000×gで8分間遠心
  6. 新しい1.5mlチューブにクロロホルム 150ulと平衡化フェノール 150ulを入れる
  7. 5の上澄み150ulを6に移してvoltex
  8. 20,000×gで8分間遠心
  9. 新しい1.5mlチューブに100%エタノール 150ul入れる
  10. 8の上澄み150ulを9に移す
  11. 20,000×gで15分間遠心(できれば低温でブレーキは弱)
  12. 上澄みを捨てて70〜80%エタノール 500ul以上加えてタッピング
  13. 20,000×g 常温で5分間遠心(ブレーキ弱)
  14. 上澄みを捨てて半日〜1日放置して乾燥
  15. ミリQ 100ulを加えて溶かし、冷蔵庫か冷凍庫へ入れて保管

 最後のミリQの量は肉片量、ペレットサイズに応じて適宜調整する。厳密に等濃度にする時は分光光度計を使う。

 DNA抽出キットを使うともっと楽に高い収率でクリーンなDNAが得られる。小さなサンプルから核DNAを抽出する場合にはこちらがお薦め。

最終更新時間:2006年12月14日 20時46分55秒