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AMPureXPによるサイズ選択

[実験プロトコル]

AMPureXPによるサイズ選択

 ゲル切りや高価な機材を用いず、磁気ビーズ溶液のみを用いて簡便なDNAのサイズ選択を行う。プライマーダイマーやdNTPの除去が行える。

必要なもの

  • 8連チューブまたは96ウェルプレート 必要数
  • AMPureXPまたはAMPureXPもどき 16uL
  • 70%エタノール 400uL
  • PCR産物 20uL
  • TEまたはSPW 40uL

手順

  1. PCR産物 20uLに対して、転倒混和したAMPureXP溶液 16uLを加える(300bp以上を取る場合)
  2. ピペッティングを10回行う
  3. 20℃5分インキュベート
  4. マグネットスタンドに立てて2分間静置する
  5. ビーズに触れないよう注意して溶液をチップで吸い取る
  6. マグネットスタンドに立てたまま、70%エタノール 200uLを加える
  7. 30秒静置してからエタノールを除く
  8. マグネットスタンドに立てたまま、70%エタノール 200uLを加える
  9. 30秒静置してからエタノールを除く(できるだけ除去)
  10. 数分間風乾し(やりすぎるとビーズが割れるので注意)、マグネットスタンドから外してTEまたはSPW 40uLを加える
  11. ピペッティングを10回行う
  12. マグネットスタンドに立てて1分間静置する
  13. 溶液を回収してラベルを振っておいた別のチューブ・プレートに移す

 200bpまで取りたい場合は1:1の比率でAMPureXPを加える。400bp以上を取る場合は0.7:1、500bp以上を取る場合は0.65:1。この後さらに精製する予定がある場合は、エタノール洗浄は1回でもよい。

最終更新時間:2017年07月15日 00時09分44秒