CTAB×フェノクロによるDNA抽出の変更点

• 追加された行はこのように表示されます。
• 削除された行はこのように表示されます。

{{category 実験プロトコル}}
*CTAB×フェノクロによるDNA抽出
　各種サンプル肉片からDNAを抽出する。キットを使う場合はキット添付のプロトコルを参照。
*必要なもの
-1.5mlチューブ 3本 /sample
-[[2x CTAB]] 300ul /sample
-10mg/ml Proteinase-K 20ul /sample
-クロロホルム 300 + 150ul /sample
-平衡化フェノール 150ul /sample
-100%エタノール 150ul /sample
-70〜80%エタノール 150ul /sample
-ミリQ 50ul /sample
-サンプル肉片 適量
*手順
+1.5mlチューブに2x CTAB 300ulと10mg/ml Proteinase-K 20ulを入れ、サンプル肉片を投入
+60℃で1時間以上 or 56℃で1日以上 or 38℃で1週間以上インキュベート
+サンプルをスピンダウン
+クロロホルム 300ulを加えてvoltex
+15,000rpmで8分間遠心
+20,000×gで8分間遠心
+新しい1.5mlチューブにクロロホルム 150ulと平衡化フェノール 150ulを入れる
+5の上澄み150ulを6に移してvoltex
+15,000rpmで8分間遠心
+20,000×gで8分間遠心
+新しい1.5mlチューブに100%エタノール 150ul入れる
+8の上澄み150ulを9に移す
+15,000rpmで15分間遠心(できれば低温でブレーキは弱)
+20,000×gで15分間遠心(できれば低温でブレーキは弱)
+上澄みを捨てて70〜80%エタノール 500ul以上加えてタッピング
+15,000rpm 常温で5分間遠心(ブレーキ弱)
+20,000×g 常温で5分間遠心(ブレーキ弱)
+上澄みを捨てて半日〜1日放置して乾燥
+ミリQ 100ulを加えて溶かし、冷蔵庫か冷凍庫へ入れて保管
　最後のミリQの量は肉片量、ペレットサイズに応じて適宜調整する。厳密に等濃度にする時は分光光度計を使う。

　DNA抽出キットを使うともっと楽に高い収率でクリーンなDNAが得られる。小さなサンプルから核DNAを抽出する場合にはこちらがお薦め。